长距离RT-PCR非特异性扩增的鉴定与排除Identification of Non-specific Amplification with Long RT-PCR
唐青海;乔宪凤;何维明;郑新民;华文君;刘西梅;陈果亮;马秋明;
摘要(Abstract):
根据已经测定的乙脑病毒WHe株全基因组序列(GenBank EF107527),设计1对引物扩增基因组全长cDNA和2对特异性的鉴定引物。经RT-PCR技术扩增后,得到约9 kb的产物,经过反复实验,鉴定为外源性污染核酸扩增产物,并加以有效的排除,初步的研究表明该产物可能是由外源性污染核酸自身反向部分互补扩增所致。
关键词(KeyWords): RT-PCR;乙脑病毒;非特异性扩增
基金项目(Foundation): 湖北省自然科学基金项目(2005ABA195)
作者(Author): 唐青海;乔宪凤;何维明;郑新民;华文君;刘西梅;陈果亮;马秋明;
Email:
DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.15.028
参考文献(References):
- [1]J萨姆布鲁克,D W拉塞尔.分子克隆实验指南[M].黄培堂,王嘉玺,朱厚础,等,译.北京:科学出版社,2002.
- [2]SCHMIDT BL.PCR in laboratory diagnosis of human Borrelia burgdorferi infec-tions[J].Clin Microbiol Rev,1997,10:185-201.
- [3]PHILIP S B,WITTWER C T.Real-time PCR technology for cancer diagnostics[J].Clin Chem,2002,48:1178-1185.
- [4]卢圣栋.现代分子生物学实验技术[M].2版.北京:中国协和医科大学出版社,1999.
- [5]ELNIFRO E M,ASHSHI AM,ROBERT J COOPER,et al.Multiplex PCR:Op-timization and application in diagnostic virology[J].Clin Microbiol Rev,2000,13:559-570.
- [6]ESPY M J,UHL J R,SLOAN L M,et al.Real-time PCR in clinical microbiolo-gy:Applications for routine laboratory testing[J].Clin Microbiol Rev,2006,19:165-256.
- [7]STURTEVANT J.Applications of differential-display reverse transcription-PCR tomolecular pathogenesis and medical mycology[J].Clin Microbiol Rev,2000,13:408-427.
- [8]C W迪芬巴赫,G S德维克斯勒.PCR技术实验指南[M].黄培堂,俞炜源,陈添弥,等,译.北京:科学出版社,1998.
- [9]郑晓飞.RNA实验技术手册[M].北京:科学出版社,2004.
- [10]曹亚.实用分子生物学操作指南[M].北京:人民卫生出版社,2003.