蚓激酶基因在大肠杆菌中的表达Expression of Lumbrokinase Gene in Escherichia coli
姜琼;易增兴;陈武;
摘要(Abstract)：
[目的]实现蚓激酶基因在大肠杆菌中的高效表达。[方法]采用RT-PCR技术,以含蚓激酶基因的质粒pMD18-Tf3为模板进行RT-PCR扩增,克隆了蚓激酶基因Tfc,并进行测序,之后将蚓激酶基因Tfc克隆到大肠杆菌表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5α,用LB培养基于30℃培养24 h后,然后调温至42℃继续培养2 h诱导蚓激酶基因表达,收集菌体,进行SDS-PAGE电泳,利用纤维平板法检验蚓激酶的活性。[结果]测序发现该基因全长729 bp,共编码243个氨基酸,GenBank登录号为EU167735。SDS-PAGE电泳表明诱导表达后菌体总蛋白在28 kD处有一特异性条带,而含空质粒pBV220的大肠杆菌经诱导表达后无该条带,表达蛋白主要以包涵体形式存在,无纤维蛋白酶活性。[结论]该研究为创新蚓激酶的生产工艺提供了依据。
关键词(KeyWords)： 蚓激酶;大肠杆菌;表达
基金项目(Foundation): 江西省教育厅科技计划资助项目(2005-229)
作者(Author): 姜琼;易增兴;陈武;
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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.31.037
参考文献(References)：
- [1]NAKAJIMA N,MIHARA H,SUMI H.Characterization of potent fibrinolyticenzymes in earthworm,Lumbricus rubellus[J].Biosci Biotechnol Biochem,1993,57(10):1726-1730.
- [2]SAMBROOK J,FRITCH E F,MANIATIS T.Molecular cloning:A laboratorymanual[M].2nd ed.New York:CSH,1989:13-17.
- [3]NAKAJIMA N,ISHIHARA K,SUGIMOTOM.Chemical modification of earth-worm fibrinolytic enzyme with human serum albumin fragment and characteriza-tion of the protease as a therapeutic enzyme[J].Biosci Biotechnol Biochem,1996,60(2):293-300.
- [4]郭怀芳,何执中,张莉.蚓激酶的临床应用进展[J].药物生物技术,2001,9(1):57-61.
- [5]吴松笛,丁桃英,王芳.蚓激酶治疗急性脑梗死的临床观察[J].陕西医学杂志,2001,30(9):551-553.
- [6]赵守荣,刘珂.普恩复胶囊治疗美尼尔病36例[J].时珍国医国药,1999,10(5):372.
- [7]J.萨姆布鲁克.分子克隆实验指南[M].3版.北京:科学出版社,2002.
- [8]黄强,陈利弘,曾令宇,等.大肠杆菌表达的人源性抗CTLA4单链抗体三种复性方法比较[J].生物医学工程学杂志,2006,23(2):388-391.