安徽农业科学

2014, v.42;No.445(12) 3479-3482

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玉米和拟南芥的原生质体制备及瞬时表达体系的研究
Protoplast Preparation and Transient Expression System in Maize and Arabidopsis

赵苏州;卢运明;张占路;赵杨敏;王磊;

摘要(Abstract):

[目的]优化玉米和拟南芥原生质体的制备条件及瞬时表达体系。[方法]以不同时期玉米叶片和拟南芥为材料分离原生质体,通过对不同酶浓度,解离时间和渗透压的研究,优化最佳分离原生质体体系;原生质体再经PEG介导的转化,通过GFP基因表达百分比鉴定原生质体活性和转化效率。[结果]玉米和拟南芥原生质分离的最佳条件为:纤维素酶1.5%,离析酶0.5%;拟南芥酶解4 h,甘露醇浓度0.4 mol/L;玉米酶解6 h,甘露醇浓度0.45~0.50 mol/L。最佳生长时期为:拟南芥6~8片叶;玉米二片叶。用去内毒素质粒经PEG(玉米30%PEG,拟南芥40%PEG)诱导转化置于黑暗下培养,原生质体活性和转化效率较高,原生质体中可以观察到明显的GFP荧光。[结论]玉米和拟南芥原生质体的制备受酶浓度,解离时间和渗透压的影响,在原生质体转化过程中,质粒DNA纯度,PEG浓度等是影响转化效率的关键因素,与拟南芥原生质体相比玉米原生质体要稳定性差一些。

关键词(KeyWords): 玉米;原生质体;拟南芥

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08003-002)

作者(Author): 赵苏州;卢运明;张占路;赵杨敏;王磊;

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