安徽农业科学

2012, v.40;No.368(07) 3901-3902+3905

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番茄黄化曲叶病毒CP基因的原核表达载体构建选择
Construction of Prokaryotic Expression Vector of TYLCV-CP Gene

乔宁;李美芹;刘永光;王兴翠;唐玉海;魏家鹏;

摘要(Abstract):

[目的]筛选出目的蛋白能够高效表达的重组质粒。[方法]利用原核表达载体pET-32a(+)和pET-28a(+)成功构建了番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TYLCV)外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因的重组质粒p32a-CP和p28a-CP,并通过PCR和双酶切鉴定了序列连接的正确性;再分别将2个载体转化至BL21(DE3)中,采用不同浓度的IPTG对其进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳检测。[结果]测序结果显示TYLCV-CP基因已定向插入p32a-CP和p28a-CP中;SDS-PAGE电泳结果显示分子量约为50 kD的目的蛋白在重组载体p32a-CP中得到了高效表达,而在重组载体p28a-CP中未表达。[结论]为下一步的抗体制备及TYLCV的免疫学检测奠定了基础。

关键词(KeyWords): 番茄黄化曲叶病毒;外壳蛋白基因;pET-32a;pET-28a;诱导表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(博士基金)项目(2009BSA07005);; 山东省高等学校科技计划项目(J10LC73);; 大宗蔬菜产业技术体系项目(CARS-25);; 山东省科技发展计划项目(2010GNC10915)

作者(Author): 乔宁;李美芹;刘永光;王兴翠;唐玉海;魏家鹏;

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