安徽农业科学

2019, v.47;No.615(02) 89-93

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ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达
Construction of Lentiviral Vector Encoding Recombinant ERO1α and Its Stable Expression in RAW264.7 Macrophages

戴安娜;胡佳慧;屈玉杏;刘婉洋;许显玉;陈风雷;

摘要(Abstract):

[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6~10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。

关键词(KeyWords): 慢病毒;ERO1α;过表达;RAW264.7细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(31702298);; 中国博士后科学基金项目(2017M621843);; 江苏省自然科学基金项目(BK20170498);; 江苏省高校自然科学研究计划资助项目(17KJD230002);; 江苏高校优势学科建设工程资助项目;; 扬州大学大学生科创基金项目(x20180623)

作者(Author): 戴安娜;胡佳慧;屈玉杏;刘婉洋;许显玉;陈风雷;

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参考文献(References):

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