安徽农业科学

2010, v.38;No.318(29) 16134-16137

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人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选
Construction of Eukaryotic Vector and Selection of Functional siRNA Target Sites of Human SUMO1

吴勇延;肖亮;单黎然;宋振;郭泽坤;

摘要(Abstract):

[目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点。[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中。寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体。用WesternBlot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果。[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确。针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在WesternBlot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达。[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础。

关键词(KeyWords): SUMO1;RNA干涉;双启动子载体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金面上项目(30870266)

作者(Author): 吴勇延;肖亮;单黎然;宋振;郭泽坤;

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参考文献(References):

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