安徽农业科学

2019, v.47;No.637(24) 107-110

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青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP检测方法的建立及应用
Establishment and Application of LAMP Detection Method for Yersinia enterocolitica in Grazing Livestock in Qinghai-Tibet Plateau

蔡其刚;唐一波;高小龙;仝丽娜;赵静;张红见;

摘要(Abstract):

为了建立特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法,采用分子生物学方法,根据GenBank数据库中该细菌的outL基因,进行了多序列比对和保守区域确定。根据其保守序列,在线设计和筛选了一套LAMP引物。温度优化及特异性和敏感性验证后建立了检测该病菌的LAMP检测方法,并对青藏高原放牧牛、羊临床粪便样品进行了检测。结果表明,LAMP检测方法的最适温度为63℃;检测其与大肠杆菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌及蜡样芽胞杆菌无交叉反应;检测下限为100 fg目的基因;利用建立的方法检测了208份放牧牦牛、藏羊粪便DNA样品,共检测到26份阳性样品,阳性率为12.5%。这表明成功建立了一种检测该病的特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法。

关键词(KeyWords): 放牧家畜;小肠结肠炎耶尔森氏菌;LAMP;outL基因;敏感性;特异性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(31560695,31560701);; 青海省农牧厅项目(NMSY-2016-07,NMSY-2018-03)

作者(Author): 蔡其刚;唐一波;高小龙;仝丽娜;赵静;张红见;

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DOI:

参考文献(References):

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