安徽农业科学

2009, v.37;No.284(31) 15160-15162

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钩距虾脊兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Calanthe graciliflora Hayata

彭德镇;孙小琴;孔令杰;李恩香;杨柏云;

摘要(Abstract):

[目的]为钩距虾脊兰种质资源研究奠定基础。[方法]以钩距虾脊兰为试验材料,利用改良的CTAB法提取钩距虾脊兰基因组DNA,并对影响ISSR扩增反应的各因素进行优化。[结果]获得了高质量的钩距虾脊兰基因组DNA;同时,建立了最适的钩距虾脊兰ISSR-PCR体系,即25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,100 ng模板DNA,240μmol/L dNTPs,1.75 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物;最佳扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,复性温度根据各引物的TM值略低1~2℃,30 s,72℃延伸50 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存。[结论]这一优化系统的建立为进一步利用ISSR分子标记技术进行钩距虾脊兰遗传多样性研究提供了基础。

关键词(KeyWords): 钩距虾脊兰;DNA提取;ISSR分子标记

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家环保总局项目(20061A0013)

作者(Author): 彭德镇;孙小琴;孔令杰;李恩香;杨柏云;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.31.128

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