安徽农业科学

2008, (16) 6653-6654+6659

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天冬酰胺酶胞外表达的初步研究
Preliminary Study on the Extracellular Expression of Asparaginase

张志红;王利群;陈驷;朱劼;

摘要(Abstract):

[目的]为降低L-天冬酰胺酶Ⅱ的生产成本提供依据。[方法]通过PCR反应扩增大肠杆菌JM109成熟区的L-天冬酰胺酶II基因(ansB),将扩增片段与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T-asp。对pMD18-T-asp与质粒pET-22b进行双酶切后,将它们连接起来,转化感受态细胞,筛选重组表达载体pET-22b-asp。利用重组表达载体pET-22b-asp转化BL21(DE3),并对其发酵条件以及分离、纯化工艺进行了初步研究。[结果]成功克隆长度为960 bp的L-天冬酰胺酶II基因。重组表达载体pET-22b-asp也构建成功,并在BL21中得到表达。在重组菌接入TB培养基后2 h加入IPTG、培养基的初始pH值为7.2、装液量为12%,L-天冬酰胺酶Ⅱ酶活最高。重组天冬酰胺酶的纯化收率为82%,比活力达196 U/mg。[结论]重组天冬酰胺酶的胞外表达大大简化了其分离步骤。

关键词(KeyWords): L-天冬酰胺酶Ⅱ;胞外表达;大肠杆菌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 江苏工业学院资助项目(ZMF04020105);; 常州市科技局资助项目(KYZ0603017C);; 镇江市科技局资助项目(KYZ0-603023C)

作者(Author): 张志红;王利群;陈驷;朱劼;

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